Desde el siglo XIV existen en España referencias de cofradías creadas en honor a la Inmaculada. La más antigua, en Gerona, data de 1330. En el siglo XVI se revitalizará este fervor con un ingente número de cofradías constituidas bajo la advocación de la Pura y Limpia Concepción de María, hermandades consagradas a las labores caritativas y la asistencia social. Los franciscanos fueron muy fieles a la creencia en la Inmaculada, y contribuyeron a su arraigo y extensión por todo el mundo.

La fiesta de la Inmaculada fue fiesta de guardar en todos los reinos de su Majestad Católica, es decir, en todo el Imperio español, desde 1644 se declaró fiesta de guardar en toda la Iglesia desde 1708 por orden del papa Clemente XI.

En 1760, en respuesta a una súplica de Carlos III, el papa Clemente XIII emite la bula Quantum Ornamenti, que proclama desde entonces a la Inmaculada patrona principal de España e Indias. En 1771 el mismo rey consagra a la Inmaculada la recién creada orden de Carlos III y un año después Clemente XIV, mediante bula papal, reconoce dicha orden, identificada mediante los colores blanco y azul.

Es patrona del Arma de Infantería del Ejército Español desde el año 1892 por Real Orden de la Reina doña María Cristina de Habsburgo-Lorena, en la que se declara oficialmente «Patrona del Arma de Infantería a Nuestra Señora la Purísima e Inmaculada Concepción, que ya lo fue del antiguo Colegio Militar y lo es de la actual Academia General y de un gran número de Regimientos». Este patronazgo tiene su origen en el Milagro de Empel, una gran victoria española en las guerras en Flandes.

Es patrona también del Cuerpo Eclesiástico del Ejército y del Estado Mayor, del Cuerpo Jurídico, y de la Farmacia militar. Los Colegios Oficiales de Farmacéuticos y las Facultades de Farmacia, también la tienen como patrona.

El primer templo dedicado a la Inmaculada Concepción en España fue el Monasterio de San Jerónimo de Granada.

En Canarias, la parroquia matriz de la isla de Tenerife está bajo la advocación de la Inmaculada Concepción en la ciudad de San Cristóbal de La Laguna, de la es la Alcaldesa y Copatrona de la ciudad y Patrona de la Cruz Roja Española de la ciudad. Esta tuvo además el honor de ser la segunda imagen de la Inmaculada en ser Coronada canónicamente en España, tras la que se encuentra en Villalpando (Zamora).

El templo más importante de la ciudad de Santa Cruz de Tenerife, está dedicado a la Inmaculada (Iglesia Matriz de la Concepción). En La Orotava (Tenerife) se encuentra la Iglesia de la Concepción que es la mejor muestra del barroco en Canarias y la Inmaculada es la patrona del templo matriz de esta localidad. En Los Realejos (también en Tenerife) se encuentra la Iglesia de Nuestra Señora de la Concepción.

En el municipio grancanario de Agaete, es la patrona de esa Villa del norte de la Isla. En la isla de Fuerteventura, en el municipio de Betancuria está la Iglesia Matriz de la Concepción, también llamada Santa María de Betancuria, parroquia matriz de la isla. Es la patrona histórica de la isla.

En Valverde se encuentra la Iglesia de Nuestra Señora de la Concepción, y es la patrona de la isla de El Hierro, la más occidental de las Islas Canarias y llamada la Isla del Meridiano, en la antigüedad.